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蛋白樣品制備中，在細(xì)胞破碎之后，既可以利用特定蛋白質(zhì)的特性來分離某一類蛋白質(zhì)，比如親和純化，比如前面介紹的磷酸化蛋白富集，或者膜蛋白富集；另外一個考慮方向是去除雜質(zhì)----去掉樣品中某些非目標(biāo)高豐度蛋白或者雜質(zhì)的干擾，同樣可以達(dá)到簡化樣本的目的。當(dāng)然要小心“倒洗腳水的時候別把嬰兒也倒掉了”，一定要選...

蛋白質(zhì)是成分高度復(fù)雜的，復(fù)雜的生物大分子包括1個或多個長鏈氨基酸.蛋白或肽折疊形成二級和三級結(jié)構(gòu)，和其他蛋白亞基相互作用來形成四級結(jié)構(gòu)。蛋白是在結(jié)構(gòu)上彼此不同的同時出于穩(wěn)定性和活性的目的要求不同的周邊環(huán)境.蛋白當(dāng)脫離他們天然的環(huán)境后是非常容易降解，變性和沉淀的。在蛋白抽提過程中，細(xì)胞和細(xì)胞器膜是被破...

當(dāng)細(xì)胞破碎的時候，蛋白水解酶就會被釋放出來或被激活，使電泳結(jié)果復(fù)雜化，影響最終結(jié)果分析。為了避免這些情況的出現(xiàn)，建議在樣品制備時盡可能在低溫下進(jìn)行。此外，許多蛋白酶在PH9以上就失活了，因此Tris堿，碳酸鈉或堿性載體兩性電解質(zhì)往往能抑制蛋白水解。但是有些蛋白酶在上述條件下仍然保持著活性，此時應(yīng)當(dāng)使...

蛋白樣品制備是許多實(shí)驗(yàn)重要的第一步，蛋白樣品由于其結(jié)構(gòu)特性各異，又必須使其*溶解和盡可能少的化學(xué)修飾，所以不可能有一個通用的技術(shù)，只能通過大量的實(shí)驗(yàn)來積累經(jīng)驗(yàn)。正如開篇所引用的兩句話中包含的深意：在研究蛋白的過程中，既需要嚴(yán)謹(jǐn)?shù)募夹g(shù)流程，規(guī)范的操作手段來確保蛋白研究的完整性，也需要將其看成是*而奇妙...

蛋白樣本制備的目標(biāo)簡言之“三高”，保留活性高，回收產(chǎn)量高，工作效率高。“三高”是苦中作樂的說法，說的輕松，這頭一條“保留活性高”便是蛋白樣品制備的痛中之痛----樣品制備過程導(dǎo)致的蛋白變性和隨后的復(fù)性工作是很令人頭痛的問題。這些年來以GBiosciences為代表的以蛋白質(zhì)研究為核心研發(fā)的公司開發(fā)了...

G-biosciences公司位于美國圣路易斯州。該公司以生產(chǎn)核酸與分子生物學(xué)產(chǎn)品起家。隨著蛋白組學(xué)和功能基因組學(xué)時代的到來，該公司將開發(fā)的重點(diǎn)轉(zhuǎn)向蛋白質(zhì)組學(xué)研究，現(xiàn)已形成了整套的蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品路線，并且形成了新的子品牌G-biosciences。目前G-biosciences有10萬種產(chǎn)品，且主要...