實驗原理

• 利用帶正電的陽離子脂質(zhì)體與帶負(fù)電的DNA通過靜電作用力結(jié)合形成DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物。
• 復(fù)合物被細(xì)胞膜表面吸附后通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞，在內(nèi)涵體內(nèi)釋放，可能通過膜融合或內(nèi)吞體破裂等方式將DNA釋放到細(xì)胞質(zhì)中。
• 最終DNA通過細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)運到細(xì)胞核，實現(xiàn)外源基因的表達(dá)。

• 核酸藥物與內(nèi)源蛋白自動組裝形成ProteanFect-核酸復(fù)合物。
• 細(xì)胞主動攝入ProteanFect-核酸復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞，核酸分子釋放，內(nèi)源蛋白被內(nèi)在降解途徑降解。
• 外源基因表達(dá)。

操作步驟

1. 將核酸與Lipofection Reagent混合形成復(fù)合物。
2. 將復(fù)合物加入細(xì)胞培養(yǎng)體系中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
3. 經(jīng)過12-72小時后進(jìn)行基因表達(dá)檢測。

1. 制備ProteanFect轉(zhuǎn)染體系。
2. 將ProteanFect轉(zhuǎn)染體系加入待轉(zhuǎn)染細(xì)胞。
3. 根據(jù)細(xì)胞類型孵育15-120分鐘，最快可在結(jié)束反應(yīng)1小時后觀察到目的基因的表達(dá)。

適用范圍

• 不適用于難轉(zhuǎn)細(xì)胞系和原代細(xì)胞，因為這些細(xì)胞可能對Lipo轉(zhuǎn)染產(chǎn)生較大毒性，轉(zhuǎn)染效率低，且對培養(yǎng)條件有特殊要求。

• 適用于多種細(xì)胞系，包括難轉(zhuǎn)細(xì)胞系和原代細(xì)胞，因為ProteanFect具有高轉(zhuǎn)染效率和低細(xì)胞毒性，且操作簡便。

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