流式細(xì)胞儀的調(diào)試和校準(zhǔn)：

　　流式細(xì)胞儀在使用前，甚至在使用過程中都要精心進(jìn)行調(diào)試，以保證工作的可靠性和最佳性。調(diào)試的項(xiàng)目主要是激光強(qiáng)度、液流速度和測量區(qū)的光路等。

　　激光強(qiáng)度：除調(diào)整反射鏡的角度以調(diào)整到所需波長的激光出光外，還要結(jié)合顯示屏上的光譜曲線使激光的強(qiáng)度輸出為最大。

　　液流速度：可通過操作臺數(shù)字顯示監(jiān)督，調(diào)節(jié)　氣體壓力大小以獲得穩(wěn)定的液流速度。

　　測量區(qū)光路調(diào)節(jié)　：這是調(diào)試工作的關(guān)鍵。需要保證在測量區(qū)的液流、激光束、90散射測量光電系統(tǒng)垂直正交，而且交點(diǎn)較小。一般可在用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球等校準(zhǔn)中完成。

　　流式細(xì)胞術(shù)中所測得的量是相對值，因此需要在使用前或使用中對系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)或標(biāo)定，這樣才能通過相對測量獲得絕對的意義。因而FCM中的校準(zhǔn)具有雙重功能：儀器的準(zhǔn)直調(diào)整和定量標(biāo)度。標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)該穩(wěn)定，有形成份形狀應(yīng)是大小比較一致球形，樣品分散性能良好，且經(jīng)濟(jì)、容易獲得。常用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球作為非生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)樣品，雞血紅細(xì)胞做為生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)樣品。微球用樹脂材料制作，或標(biāo)有熒光素，或不標(biāo)記熒光素。所用的雞血紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)樣品制作過程昭下：取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血（抗凝劑：雞血=1：4），經(jīng)PBS清洗3次，再用5～10ml的1.0%戊二醛與清洗后的雞紅細(xì)胞混合，室溫下振蕩醛化24h，最后經(jīng)PBS再清洗，貯4℃冰箱中備用。需要指出的是因?yàn)槲唇?jīng)熒光染色，所測光信號為雞血紅蛋白的自發(fā)熒光。

　　儀器的操作和使用

　?、俅蜷_電源，對系統(tǒng)進(jìn)行預(yù)熱；

　?、诖蜷_氣體閾，調(diào)節(jié)　壓力，獲得適宜的液流速度；開啟光源冷卻系統(tǒng)；

　　③在樣品管中加入去離子水，沖洗液流的噴嘴系統(tǒng)；

　?、芾眯?zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)樣品，調(diào)整儀器，使在激光功率、光電倍增管電壓、放大器電路增益調(diào)定的基礎(chǔ)上，0和90散射的熒光強(qiáng)度最強(qiáng)，并要求變異系數(shù)為最?。?/div>